MATERIALS & METHODS: The mice were separated into the groups of the estrous cycle (proestrus, estrus,
metestrus and diestrus) (n=5). Female Balb-c mice were sacrificed and brains are perfused, removed,
embedded in paraffin. The sections were stained with AQP1 antibody by using immunohistochemical technique.
RESULTS: Immunolocalization of AQP1 was significantly expressed in α2 and β1 tanycytes in proestrus and
diestrus cycle. Moreover, AQP1 immunoreactivity was observed at the apical membrane of the α1 and also
slightly seen at the apical membrane of the α2 tanycytes in estrus and metestrus mice groups.
CONCLUSION: Our results showed that AQP1 expression was found in different subtypes of tanycytes in the
third ventricle during eustrus cycles of female mice. We believe this difference is due to the interaction of
tanycytes with different functions or structure of cells.
Keywords: Tanycytes, Aquaporin-1, Immunohistochemistry
Poster Bildiriler / Poster Presentations
108
P15
Farede ventriculus tertius tanisit hücrelerinde Aquaporin-2'nin ekspresyonu
Necdet Demir, Berna Sözen, Gamze Tanrıöver
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, Antalya
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Histology and Embryology, Antalya, Turkey
AMAÇ: Tanisitler, hipotalamik median eminensinin rostal ve kaudal sınırları arasında üçüncü ventrikülün zemini
ve ventrolateral duvarları hattında özelleşmiş, uzamış glial orijinli ependimal hücrelerdir. Tanisitler heterojen bir
yapıya sahip olup, anatomik ve morfolojik özelliklerine bağlı olarak α1, α2, β1 ve β2 şeklinde alt tiplere
ayrılmaktadır. Aquaporinler (AQP) homeostasisin belirli yönlerini kontrol etmek için hücre zarları ve
mekanizmalar yoluyla ozmotik güdümlü su, gliserin, üre ya da iyonların taşınması için geçiş sağlayan geniş
yayılışa sahip, membrana takılı bir su kanal proteinleri ailesidir. Literatürde yayınlanan birçok çalışmaya göre,
AQP2 geniş oranda böbrek toplayıcı kanallarında ekspre olan ayrıca, ependimal hücre tabakası, spinal kord,
subkortikal beyaz cevher ve hipokampüsü de içine alan merkezi sinir sisteminin çeşitli bölgelerinde de
bulunduğu gösterilmiştir. Tanisitler üçüncü ventrikül ile hipotalamik nükleuslar ve median eminens arasında
hücresel bir bağlantı kurmaktadırlar. Bu bağlantılar bu alanlar arasında su madde alışverişiyle ilgili olabilir.
Çalışmamızda AQP2 proteininin üçüncü ventrikül tanisit hücrelerindeki ekspresyonu ve cinsiyete bağlı farklılıkları
incelenerek değerlendirilmiştir.
GEREÇ ve YÖNTEM: Dişi (n=6) ve erkek (n=6) Balb-c fareler öldürüldü, beyinleri çıkarılarak parafine gömüldü.
Alınan kesitlere AQP2 antikoru kullanılarak immünohistokimyasal boyama yapıldı.
BULGULAR: AQP2’nin immunlokalizasyonu dişi fare grubunda α2, β1 ve β2 tanisitlerde yoğun bir boyanma
modeline sahipken, erkek fare grubunda α1, α2, β1 ve β2 tanisitlerin sadece apikal membranlarında hafif bir
immunreaktivitesi belirlenmiştir.
SONUÇ: Bulgularımız ışığında, tanisitlerin farklı alt tiplerinin AQP2 proteinini farklı şiddette ekspre ettiklerini
gözlemledik. Bu ekspresyonun cinsiyete bağlı farklılıklar göstermesi de dikkat çekicidir. Sonuçlarımız
doğrultusunda, ileride planlanacak moleküler çalışmaların, AQP2’nin tanisitlerde farklı ekspresyon modelini
fonksiyonel olarak daha detaylı bir şekilde açıklayabileceği kanaatindeyiz.
Anahtar Kelimeler: Tanisitler, Aquaporin-2, İmmunohistokimya
Expression of aquaporin-2 (AQP2) in ventriculus tertius tanycyte cells in the
female and male mice
OBJECTIVES: Tanycytes are specialized, elongated ependymal cells of glial origin that line the floor and
ventrolateral walls of the third ventricle between the rostral and caudal limits of the hypothalamic median
eminence. Aquaporins (AQPs) are a family of widely distributed membrane-inserted water channel proteins
providing a pathway for osmotically-driven water, glycerol, urea or ions transport through cell membranes and
mechanisms to control particular aspects of homeostasis. Also, AQP2 was found in selected regions of central
nervous system (CNS) including ependymal cell layer, spinal cord, subcortical white matter and hippocampus.
Tanycytes have established cellular connections between third ventricle, hypothalamic nuclei and median
eminence. The tanycytes bridge the lumen of the third ventricle may be related with water and substance
exchanging. Therefore, in this study our aim was to investigate the expression and distribution of AQP2 protein
in ventriculus tertius tanycytes in female and male mice.
MATERIALS & METHODS: Male (n=6), female (n=6) Balb-c mice were sacrificed and the brains were
embedded in paraffin. The sections were stained with AQP2 antibody by using immunohistochemistry.
RESULTS: AQP2 immunoreactivity was highly observed in α
1
, β
1
and β2 tanycytes in female mice and was
slightly seen at the apical membrane of α
1
, α
2,
β
1
and β
2
tanycytes in male mice groups.
CONCLUSION: Our results showed that different subtypes of tanycytes have different AQP2 expressions. The
differences might play an important role in coordination of tanycytes between female and male mice. Further
studies will help us to an improved understanding molecular differences and new functions of tanycytes.
Keywords: Tanycytes, Aquaporin-2, Immunohistochemistry
Poster Bildiriler / Poster Presentations
109
P16
Farede ventriculus tertius tanisit hücrelerinde aquaporin-4'ün ekspresyonu
Esma Konuk, Berna Sözen, Gamze Tanrıöver, Necdet Demir
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, Antalya
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Histology and Embryology, Antalya, Turkey
AMAÇ: Aquaporin’ler (AQP) fizyolojik koşullarda su dengesinin düzenlenmesinde önemli rol oynayan su kanalı
görevinde olan proteinlerdirler. AQP4, beyindeki temel aquaporin alt tipidir, osmolasyon ve su
metabolizmasında önemli rol oynadığına inanılmaktadır. AQP4, beyin omurilik sıvısı ara yüzünde ve kılcal
damar yüzündeki ependimositler ve astrosit ayaklarında yoğun eksprese olmaktadır. Tanisitler, portal kılcal
damarlarla beyin omurilik sıvısı arasında köprü kuran bipolar hücrelerdirler ve nöroendokrin olaylarda BOS ile
bağlantılı olabilirler. Onlar üremenin nöroendokrin kontrolünü içeren ventromedial hipotalamik bölgede
lokalizedirler, bu sebepten dolayı tanisitlerde AQP4 ekspresyonu cinsiyet bağımlı olabilir. Çalışmamızda AQP4
proteininin dişi-erkek farkına bağlı olarak üçüncü ventrikülün tanisitlerindeki dağılımı ve bu dağılımdaki
farklılıkların gösterilmesi amaçlanmıştır.
GEREÇ ve YÖNTEM: Dişi (n=6) ve erkek (n=6) Balb-c fareler öldürüldü, beyinleri çıkarılarak parafine gömüldü.
Alınan kesitler AQP4 antikoru kullanılarak immünohistokimyasal yöntemlerle boyandı.
BULGULAR: AQP4’ün dişi fare grubunda α1, α2, β1 ve β2 tanisitlerde yoğun bir immunreaksiyon gösterdiği
gözlenirken erkek fare grubunda aynı boyanma paterninin daha zayıf ve sadece apikal membranla sınırlı olduğu
dikkati çekmektedir.
SONUÇ: Sonuç olarak, tanisitlerin alt tipinde eksprese olan AQP4‘ün immunohistokimyasal dağılımını literatür
bilgisindeki yetersizlikten dolayı yorumlamak oldukça güçtür. Sonuçlarımız doğrultusunda dişi ve erkek
gruplarındaki tanisitlerin farklı alt gruplarında AQP4 ekspresyon farkının cinsiyete bağımlı olabileceğini
söyleyebiliriz.
Anahtar Kelimeler: Tanisitler, Aquaporin-4, İmmünohistokimya
Expression of aquaporin-4 (AQP4) in ventriculus tertius tanycyte cells in mice
OBJECTIVES: Aquaporins (AQP) are water channel proteins that play important roles in the regulation of water
homeostasis in physiological conditions. AQP4, the main aquaporin subtype in the brain, is believed to play a
major role in water metabolism and osmoregulation. The AQP4 is abundantly expressed in astrocyte foot
processes, ependymocytes facing capillaries and brain-cerebrospinal fluid (CSF) interfaces. Tanycytes are
bipolar cells bridging the CSF to the portal capillaries and may link the CSF to neuroendocrine events. They are
localized in the ventromedial hypothalamic area which are involved in the neuroendocrin control of
reproduction. For this reason AQP4 expression on tanycytes may be sex-dependent. Therefore, in this study the
distribution of AQP4 protein was investigated in subtypes of tanycytes in the third ventricle in order to show
whether this protein may differ in the brains of female and male mice.
MATERIALS & METHODS: Male (n=6), female (n=6) Balb-c mice were sacrificed and their brains were
embedded in parafin. The sections were stained with AQP4 antibody by using immunohistochemical technique.
RESULTS: AQP4 immunoreactivity was observed to be high in α1,2 and β1,2 tanycytes of the female group and
it was slight in the apical membrane of α1,2 and β1,2 tanycytes epithelium in the male mice group.
CONCLUSION: In conclusion, the lack of literature on the immunohistochemical distribution of AQP4 in
subtypes of tanycytes makes it difficult to interpret the role of this protein. Our results indicate that the
expression of AQP4 on different subtypes of tanycytes might be sex-dependent.
Keywords: Tanycytes, Aquaporin-4, Immunohistochemistry
Poster Bildiriler / Poster Presentations
110
P17
Fare üçüncü ventrikül tanisit hücrelerinde aquaporin 5 (AQP5) ekspresyonunun
immunohistokimyasal olarak gösterilmesi
Ramazan Yavuz Arıcan
1
, Berna Sözen
2
, Gamze Tanrıöver
2
, Necdet Demir
2
,
Bikem Süzen
1
1
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Anatomi Anabilim Dalı, Antalya
2
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embryoloji Anabilim Dalı, Antalya
1
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Anatomy, Antalya, Turkey
2
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Histology and Embryology, Antalya, Turkey
AMAÇ: Tanisitler ventromedial hipotalamik nükleuslar çevresinde, üçüncü ventrikülü döşeyen modifiye
ependimal hücreleridir. Tanisitler farklı yerleşimler ve sonlanmalar sonucu α
1
, α
2
, β
1
, β
2
alt türlerine
ayrılmaktadırlar. Aquaporinler (AQP), suyun transportunda önemli rol oynayan su kanal proteinleridirler. Sadece
suya özgül olan, büyük oranda suya ve gliserole geçirgen olan, ayrıca daha büyük moleküllerin transportunda
rol oynayan aquaporinler olarak üç gruba ayrılmaktadırlar. AQP 5 sadece suya özgüldür. Tükürük bezleri,
lakrimal bez ve bronşlarda ekspre olduğu görülmüş; tükürük, gözyaşı ve pulmoner sekresyonda da önemli
rolleri gösterilmiştir. Biz bu çalışmada, fare üçüncü ventrikülünü döşeyen tanisit hücrelerinin alt tiplerinde AQP
5’in ekspresyonunu göstermeyi hedefledik.
GEREÇ ve YÖNTEM: Çalışmada Balb-c ırkı erkek (n=6) ve dişi (n=6) yetişkin fareler kullanılmıştır. Farelerin
beyinleri perfüzyon fiksasyonunu takiben çıkartılmış ve parafin bloklar elde edilmiştir. Histolojik kesitlerde AQP5
proteininin immünoreaktivitesi gösterilmiş ve erkek dişi arasındaki fark ortaya konmuştur.
BULGULAR: AQP5 ekspresyonu erkek farelerde tanisitlerin tüm alt gruplarda görülürken; dişi farelerde ise α
2
,
β
1
, β
2
tanisitlerinde immünreaksiyon dikkat çekicidir. α
1
‘de ise herhangi bir immünreaksiyona rastlanılmamıştır.
SONUÇ: Fare üçüncü ventrikül duvarındaki tanisit hücrelerinde AQP 5 ekspresyonu cinsiyete ve tanisit alt
gruplarına göre değişiklik göstermektedir. Bu bölgede yer alan tanisitlerin AQP5 expresyonunda sergilediği
farklılığın,
üremenin
hipotalamo-hipofizeal
nöröendokrin
kontrolüyle
ilişkili
olarak
ortaya
çıktığını
düşündürmektedir.
Anahtar Kelimeler: Aquaporin-5, Tanisit, İmmünohistokimya
The expression of aquaporin 5 (AQP5) on the mouse third ventricle tancytes: A
immunohistochemical study
OBJECTIVES: The tanycytes are modified ependymal cells covering the third ventricle around the ventromedial
hypothalamic nuclei. They are divided into α
1
, α
2
, β
1
, β
2
subtypes according to their localizations and insertions.
The aquaporins are important water channel proteins, responsible for the transportation of water. There are
three known subtypes of aquaporins: ones specific only to water, ones highly permeable to water but also
transport glycerol, and the ones permeable to larger solutes. AQP 5 is specific only to water. AQP 5 is expressed
in salivary gland, lacrimal gland and bronches. They have a great role in the production of saliva, tears and
pulmonary secretion. The aim of the present study is to identify sex dependent changes in the AQP5 expression
in tanycyte subtypes in the third ventricle of mouse.
MATERIALS & METHODS: In our study we used 6 male (n=6) and 6 female (n=6) adult Balb-c mouse. The
mouse brains were extracted following the perfusion fixation and the samples’ paraffin blocks were obtained.
The immunreactivity of AQP5 was shown and the difference between male and female subjects was presented.
RESULTS: The AQP5 expression is identified in all subtypes of tanycytes in the male group. In the female
group the immunoreaction of AQP 5 in α
2
, β
1
, β
2
tanycytes is remarkable, while there was no immunoreaction in
α
1
tanyctes.
CONCLUSION: As a result of our study the expression of AQP5 differs according to sex and tanycyte subtypes
in the 3rd ventricle tanycytes of mouse brain. We think that, the variable AQP5 expression of the tanyctes
located in this region may indicate the relation between the reproduction and the hypothalamo-hypophyseal
neuroendocrine control.
Keywords: Aquaporin-5, Tanycytes, Immunohistochemistry
Poster Bildiriler / Poster Presentations
111
P18
Fare beyninde aquaporin (AQP) 8 membran proteini lokalizasyon ve
ekspresyonları
Barış Özgür Dönmez
1
, Berna Sözen
2
, Gamze Tanrıöver
2
, Bikem Süzen
3
, Necdet Demir
2
1
Akdeniz Üniversitesi, Antalya Sağlık Yüksek Okulu, Beslenme ve Diyetetik Bölümü, Antalya
2
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, Antalya
3
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Anatomi Anabilim Dalı, Antalya
1
Akdeniz University, Antalya School of Health, Department of Nutrition and Dietetics, Antalya, Turkey
2
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Histology and Embryology, Antalya, Turkey
3
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Anatomy, Antalya, Turkey
AMAÇ: Aquaporinler su kanalları olarak da bilinen ve bunun dışında birçok molekülün taşınımına da katkıda
bulunan bir protein ailesidir. Aquaporinlerin bilinen (AQP 0-12) 13 adet üyesi vardır. Bunlardan AQP 8 suya ve
amonyağa geçirgenliği olan bir membran kanalıdır ve pek çok dokuda iç mitokondriyal membranda eksprese
olur. Üçüncü ventrikül duvarında yer alan ependimal tanisit hücrelerinin en önemli özelliği polarizasyonlarıdır.
Bu hücrelerin gövdeleri ventrikülün duvarını döşemelerine rağmen bazal uzantılarıyla nukleuslarda ve median
eminensde yer alan damar çevresiyle bağlantı kurmaktadırlar. Çalışmamızda AQP 8 membran proteininin
beyindeki transport sisteminde rol alabileceği hipotezini kurduk ve bu proteinlerin tanisit hücrelerindeki seviye
ve ekspresyonlarını immünohistokimya yöntemiyle ortaya koymayı amaçladık.
GEREÇ ve YÖNTEM: Çalışmamızda altı adet BalbC cinsi erkek fare kullanılmıştır. Bütün beyin dokuları %4’lük
parafolmaldehit %15 pikrik asitli fiksatifle perfüze edildikten sonra dokular parafine gömülmüş ve 5
µ
m’lik
kesitler alındıktan sonra immünohistokimya yöntemi ile boyanmışlardır.
BULGULAR: Çalışmamızdan yaptığımız ışık mikroskobik gözlemelere göre tanisit hücrelerin alt tipleri olan alfa 1
hücrelerinde kuvvetli AQP 8 immünoaktivitesi görülürken, alfa 2 hücrelerinde orta derecede immünoaktivite
gözlenmiştir. Tanisit hücrelerin diğer alt tipleri olan beta1 ve beta2 hücrelerinde ise immünoaktivite zayıftır.
SONUÇ: AQP 8 proteininin fare beyninde tanisit hücrelerinin alt tiplerinde farklı ekspresyon göstermesi,
tanisitlerin bazal uzantılarının farklı bölgelerde sonlanmasına bağlı olarak farklı transport sistemlerinde rol
oynayabileceklerini düşündürmektedir.
Anahtar Kelimeler: Aquaporin, Tanisit hücreleri, İmmünohistokimya, Üçüncü ventrikül
Expression and localization of aquaporin (AQP) 8 proteins in mice brain
OBJECTIVES: The aquaporins (AQPs) are a family of integral membrane proteins that largely function as water
channels. To date 13 members of the AQP family (AQP 0-12) have been reported. AQP8 is a membrane channel
permeable to water and ammonia and expressed in the inner mitochondrial membrane of several tissues. One
dominant feature of ependymal tanycytes is their marked polarisation; although tanycyte cell bodies line the
border of the third ventricle, they also send processes to the vascular walls of the nucleus and eminentia
medialis. In this study, we hypothesize that AQP 8 proteins may play a role on the third ventricle’s transport
system of mice brain. The goal of the study is to determine the level and expression of AQP 8 on tanycyte cells
in mice brain by using immunohistochemistry technique.
MATERIALS & METHODS: In our study, six male BalbC mice were used. The brains were perfused with 4%
paraformaldehyde and 15% picric acid. The tissue was embedded in parafin and sections were cut in 5
µ
m
thickness. Immunohistochemistry staining method was used for all sections.
RESULTS: We observed intense immunoreactivity in alpha 1, moderate immunoreactivity in alpha 2 and weak
immuno staining in beta 1 and beta 2 tanycyte cells for AQP 8 protein.
CONCLUSION: AQP 8 protein observed a different subtypes of tanycyte cell and also different expression level
in the third ventricle. The tanycytes bridge the lumen of the third ventricle might play an important role water
and substance changing and also the expression pattern in the tanycytes might be explained the transport
system.
Keywords: Aquaporin, Tanycyte cell, Immunohistochemistry, Third ventricle
Poster Bildiriler / Poster Presentations
112
P19
Aquaporin (AQP) 7 ve aquaporin (AQP) 9 proteinlerinin fare östrus siklusu
evrelerinde tanisit hücrelerindeki ekspresyonu
Aylin Yaba
1
, Berna Sözen
1
, Gamze Tanrıöver
1
, Bikem Süzen
2
, Necdet Demir
1
1
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Histoloji ve Embriyoloji Anabilim Dalı, Antalya
2
Akdeniz Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Anatomi Anabilim Dalı, Antalya
1
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Histology and Embryology, Antalya, Turkey
2
Akdeniz University, Faculty of Medicine, Department of Anatomy, Antalya, Turkey
AMAÇ: Tanisitler, üçüncü ventrikülün zemini ve ventrolateral duvarları hattında özelleşmiş, bazal uzantılı
ependimal hücrelerdir Fonksiyonları hala tartışmalı olan bu hücrelerin üçüncü ventrikül ile uzandığı bölgeler
arasında sıvı ve madde iletimiyle ilgili rol oynayabileceği düşünülmektedir. Aquaporinler (AQP’ler), membran
içerisine yerleşmiş, su transportundan sorumlu olan bir protein ailesidir. Aquaporin ailesi üyelerinden AQP7 ve
AQP9 suyun yanısıra gliserol gibi bazı küçük moleküllere de geçirgen olmaları nedeniyle aquagliseroporinler
adını almaktadır. Tanisitlerin ilişkide olduğu Arkuat ve Periventriküler nükleusların üremenin hipotalamik
kontrolünde etkili olmaları nedeniyle AQP7 ve AQP9’un tanisitlerdeki ekspresyonunun, östrojen bağımlı
olabileceği hipotezi oluşturuldu. Hipotezi test etmek amacıyla fare östrus siklusu evrelerinde tanisit hücrelerinde
AQP7 ve AQP9 proteinlerinin düzeyi immünohistokimya yöntemi ile belirlenmeye çalışıldı.
GEREÇ ve YÖNTEM: Çalışmada 12 haftalık BalbC türü dişi fareler kullanıldı. Östrus siklusu evreleri, günlük
yapılan vajinal simir ile belirlendi. Östrus siklusu; proöstrus (n=3), östrus (n=3), metöstrus (n=3) ve diöstrus
(n=3) olmak üzere 4 evrede değerlendirildi.. Bu çalışmada AQP7 ve 9 proteinlerinin lokalizasyonlarına
immünohistokimya tekniği ile bakıldı ve immünreaksiyon şiddetleri değerlendirildi.
Dostları ilə paylaş: |