İsim Okul Numarası

05.06. Malt Ekstrakt Agar

Bir çok mantarları izole etmede ve üretmede kullanılan bir ortamdır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır :

Malt ekstrakt   20.0 g.

Pepton              1.0 g.

Glukoz             20.0 g. (filtrasyonla sterilize   edilir)

Agar                20.0 g.

Distile su     1000.0 ml.

Maddeler distile suya konur, karıştırılır ve ısıtılarak eritilir. Otoklavda 1200C'de 20 dakika sterilize edilir, sonra glukoz solusyonu katılır ve iyice karıştırılır. Tüplere taksim edilir.

05.07. Yulaf Unlu Agar

Streptomycetesleri, üretmede iyi bir ortamdır. Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Yulaf unu      30 .0 g.

Agar              15 .0 g.

Distile su    1000 .0 ml

Yulaf unu 500 ml. distile suya konur kaynatılarak eritilir ve süzülür. Su ilâvesiyle 1 litreye tamamlanır. Otoklavda 120° C'de bir saat sterilize edilir. Sonra agar ilave edilir ve 120° C'de tekrar otoklavda 20 dakika sterilize edilir. Tüplere taksim edilir.

05.08. Patates Dekstroz Agar

Bu ortam M. audouinii ile M. canis 'i ve  T. rubrum ile  T. mentagrophytes 'i ayırmada kullanılır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır :

Patates     200    gr. (haşlanmış soyulmuş küçük parçalar halinde)

Dekstroz    20 .0    g. (filtrasyonla sterilize edilir)

Agar          15 .0   g.

Distile su    1000.0  ml.

pH               6.6

Maddeler distile su da kaynatılarak eritilir, tüplere taksim edilir ve otoklavda 10 dakika sterilize edilir. (Patates ekstresi: yıkanmış, haşlanmış ve soyulmuş patates, iyice ezilir. Bundan 100 g. alınır ve 300 ml. suya karıştırılır. Buz dolabında bir gece bırakılır, süzülür ve otoklavda sterilize edilir).

05.09. Pirinçli Besi Yeri

Dermatofıtler için kullanılan bir ortamdır. M. audouinii ile M. canis 'i ayırmada kullanılır. Aşağıdaki tarzda hazırlanır :

Pirinç           16.0 g.

Distile su      50.0 ml.

Bir erlen mayere konan pirinç ve su, açık otoklavda kaynatılır ve tüplere taksim edilir. Otoklavda 12O° C'de 20 dakika sterilize edilir.

05.10. Czapek Agar

Penicillium, Aspergillus, Nocardia, v.s. mantarlar üzerinde araştırma yapmak için kullanılır. Aşağıdaki tarzda hazırlanır :

Sakkaroz  30.0 g.(filtrasyonla sterilize edilir)

K2HPO4                1 .0  g.

MgS04.  7.H2O      0.5  g.

Fe S04                  0.1   g.

NaNO3                  2.0  g.

Agar                      15.0  g.

Distile su                1000.0  ml.

Maddeler (sakkaroz hariç) distile suya konur, eritilir ve otoklavda sterilize edilir. Sonra içine steril sakkaroz solusyonu ilave edilir. Petri kutusu veya tüplere taksim edilir.

05.11. Dermatofit Test Medium ( DTM )

Dermatofitlerin ayırımı için kullanılan indikatörlü bir ortamdır. Ekseri dermatofitler bu besi yerinde kırmızı renk oluştururlar. Saprofitler; bakteri ve mayalar renk meydana getirmezler.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır :

Phytone                 10 .0  g. (Baltimore)

Glukoz                   10 .0  g.

Agar                      20 .0  g.

Fenol red sol.         40.0 ml.

HCL, 0.8 M         6.0 ml.

Cyclohexamide   0.5 g. (Upjoehn Co.)

Gentamycin sulfat 100 mcg./ml. (Schering Corp)

Chlortetracycline HCI 100 mcg./m lederle lab)

Çok duyarlı olan besi yeri formülüne giren maddeler, belirlenen yerlerden sağlanması gereklidir. Aksi halde duyarlılığı azalır. Aşağıdaki tarzda hazırlanır.

1- Phyton, glukoz ve agar 1000 ml. distile suya katılır, ısıtılır ve karıştırılarak eritilir.

2- Karıştırılırken, 40 ml. fenol red solusyonu konur (fenol red 0.5 g. + 15 ml. 0,1 N NaOH içinde eritilir ve distile su ile 100 ml.ye tamamlanır.)

3- Besi yerinin pH'sı, 6 ml. 0,8 M HCI ile ayarlanır.

4- Cyclohexamide 0.5 g. + 2 ml. aseton içinde eritilerek ortama karıştırılır.

5- Gentamycin sulfat, 1 ml. sinde 100 mcg./ ml. olacak şekilde 2 ml. cam distile su içinde eritilir ve karıştırılır.

6- İyice karıştırıldıktan sonra 12 Ibr basınçta 10 dakika otoklave edilir ve 47° C'ye kadar ılıklaştırılır.

7- Klortetrasiklin 25 ml. steril camdan çekilmiş distile suda eritilir, katılır ve iyice karıştırılır.

8- Ağzı vidalı kapaklı şişelere konur ve yatık tarzda katılaştırılır. Vasatın pH'sı 5,5 + 0,1 kadardır.

Buzdolabında saklanır. Kontaminasyonlar yanlış sonuç verdirebilirler. İnokule edildikten sonra, kapağı gevşetilir ve 28-30° C. inkubasyona konur. Sonuç 14 güne kadar değerlendirilmelidir. İki haftadan sonraki değerlendirilmelerde yanlış pozitif reaksiyon görülebilir. Pozitif olgularda ortamın sarı rengi kırmızıya dönüşür.

05.12. Cysteinli Kanlı Agar

Mantarların maya formunu devam ettirmede kullanılan bir ortamdır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Nütrient agar 100 ml.

Glukoz                 1  g (filtrasyonla sterilize edilir)

Cysteine         0.1 g.

Nütrient agar eritildikten sonra içine steril 1 gr. dekstroz ile 0.1 gr. cysteine katılır, iyice karıştırılır ve homojen hale getirilir. Ortam 42-45° C'ye kadar ılıtıldıktan sonra içine 10 ml. steril defibrine koyun kanı ilave edilerek tekrar iyice karıştırılır ve petri kutularına (veya tüplere yatık olarak) dökülür.

05.13. Salvin YP Ortam

Bu besi yeri Histoplasma capsulatum için kullanılır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Proteose-pepton    10.00 g.

Noepeptone           3.25  g.

Tryptone              3.25 g.

Glukoz                   2.0    g.(filtrasyonla sterilize edilir)

NaCl                    5.00 g.

Na2HPO4              2.50  g.

Agar                      1.75 g.

Distile su                1000  ml.

pH                         6.5-7.5

Yukarıdaki maddeler distile suya konarak ısıtılır,iyice eritilir ve pH'sı ayarlanır. Otoklavda 121 oC’de 15 dakika sterilize edilir. Sonra içine steril glukoz solüsyon katılır ve iyice karıştırılır. Tüplere 10 ml. miktarında dağıtılır. Buzdolabında muhafaza edilir.

05.14. Sabhi Agar Besi Yeri

Bu ortam doku sıvılardan, Blastomyces dermatitidis ve H. capsulatum 'u izole etmede kullanılır. Besi yerine: %10 steril koyun kanının (veya insan kanı) ilavesi izolasyon şansını artırır. Hazır besi yeri, oda ısısında (25°C) 2 ay kadar muhafaza edilebilir. Bu besi yeri aynı zamanda miselyal formları maya formuna döndürmede de (37°C'de.) kullanılır. İçine, genellikle, kloromisetin katılır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır.

Dana beyni infusyonu          100  g.

Sığır kalbi infusyonu            125  g.

Proteose pepton                             5  g.

Neopeptone                                   5  g.

Glukoz                                           21  g.

NaCl                                             2.5 g.

Na2HPO4                                      15  g.

Hazır ortamdan 59 g. alınarak bir litre distile suya konur ve ısıtılarak eritilir. Otoklavda sterilize edildikten sonra 50°C'ye kadar ılıklaştırılır ve içine 1 ml. steril 100 mg./ml. kloromisetin solusyonu konur ve karıştırılır. Tüplere veya petri kutularına dökülür.

05.15. Casitone Nişasta Agar

Actinomyces türlerinde nişasta hidrolizasyonu testi için kullanılır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Kalp infusyon buyyonu       25.0 g.

Casitone                                        4.0 g.

Maya ekstraktı                               5.0    g.

Nişasta (eriyebilir)                          5.0    g.

Agar                                              15.0    g.

Distile su                                        1000.0   ml.

pH                                                 7.0

Maddeler distile suda ısıtılarak eritildikten sonra pH 7.0'ye ayarlanır ve tüplere 8 ml. miktarında taksim edilir

05.16.Thioglucolate Besi Yeri

Actinomyces türlerinin izolasyonunda kullanılır.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Tripticase                           20.0   g.

NaCl                                 5.0  g.

K2P04                                2.0  g.

Sodyum Thioglucolate        1.0 g.

Metilen mavisi                    0.5. ml

Distile su                            1000.0 ml

Maddeler, distile suda eritilir ve tüplere 8 ml. taksim edildikten sonra otoklavda sterilize edilir.

05.17. Nitrat Redüksiyon Ortamı

Actinomyceteslerin nitrat redüksiyon durumunu ölçmede kullanılır. Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Kalp infusyon buyyonu       25.0 g.

Maya ekstraktı                5.0 g.

Casitone                          4.0 g.

KNO3                              1.0 g.

Distile su                            1000.0 ml

pH                                   7.6

Maddeler distile suda ısıtılarak iyice eritildikten sonra tüplere 5 ml. miktarında taksim edilir ve otoklavda sterilize edilir. Testin uygulanışı aynen bakterilerdeki gibidir.

05.18. Kanlı Agar

Laboratuarlarda genel amaçla hazırlanan kanlı agara tiamin 10 mg. / litre ilavesiyle dermatofitlerin (T. mentagrophytes, T. rubrum, T. schoenleinii, T. verrucosum ve T. violaceum) makrokonidia formasyonunu artırır.

06. Diğer  Test  Ortamları  ve  Yöntemler

Mantarların kesin teşhisi oldukça güçtür ve bu konuda tecrübeli elamanlara gereksinim vardır. Laboratuara gelen materyalin muayenesi, ekimler sonu elde edilen mantar kolonilerinin makro-ve mikro morfolojileri, hayvan inokulasyonları ve serolojik-alerjik testler çoğu zaman güvenilir bir teşhise götürmeyebilir. Ayrıca, dermatofit mantarların koloni morfolojileri genellikle birbirlerine de çok benzerler. Bu nedenle yukarıda bildirilen muayenelerin dışında ve yanı sıra, bazı ayırıcı testlerin yapılması ve bunun sonuçlarının, diğer muayenelerinkilerle birleştirilerek teşhis konması daha isabetli olur. Bu amaçla aşağıdaki önemli bazı ortamlardan yararlanılır.

06.01. Kazein Agar

Ortam genellikle Nocardia ile Streptomycesleri ayırmada kullanılır. Streptomycesler kazeini hidrolize ederler.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Casein (%10 asit hidrolize)  25.0   ml.(vitaminsiz)

Glukoz                                 40.0   (filtrasyonla sterilize edilir.)

MgSO4                                   0.1   g.

KH2PO4                                 1.8    g.

Agar                                     20.0   g.

Distile su                          1000.0  ml

Maddeler distile suya konur, alttan ısıtılır ve karıştırılarak eritilir. Erlen mayerlere (100 ml. lik) taksim edilir ve 120°C'de 15 dakika otoklavda sterilize edilir.

Bu ortam, aynı zamanda sütle de hazırlanabilir. Bu taktidir de açık otoklavda 1000°C de 3 gün arka arkaya 45 - 50 dakika sterilize edilmiş yağsız sütten %10'luk bir suspansiyon hazırlanır. Sonra, % 2 erimiş agarla karıştırılarak petri kutularına dökülür.

Bu besi yerinde Streptomyces türleri çok geniş bir hidrolizasyon alanı meydana getirirler.

06.02. Peptonlu Su

Bazı dermatofitlerin (T. mentagrophytesve T. rubrum) identifikasyonunda %10 peptonlu su kullanılır. T. mentagrophytes yüzeyde ürer ve kolonileri hafif kahve renklidir. T. rubrum ise, beyaz, pamuk gibi ve hemisfer koloniler oluşturur.

06.03. Amonyum Nitrat Agarı

Bu ortam, Trikofıtonların üreme karakterlerini saptamada işe yarar. Yukarıda bildirilen kazein agar besi yerindeki casein yerine,1.5 gram NH4N03 koymakla elde edilen bu ortam aynı tarzda hazırlanır.

NH4NO3                1.5  g.

Glukoz                   40.0 g. (filtrasyonla sterilize edilir)

Mg504                   0.1 g.

KH2PO4                1.8 g.

Agar                      20.0 g.

Distile su   1000.0 ml

T. megninii ile M. gallinae 'yi ayırmada amonyum nitrat agar içine histidin (30 mcg./ml.) katılır. T. megninii histidinli ortamda ürer, M. gallinae ise her iki ortamda (histidinli ve histidinsiz) üreyebilir.

06.04. Üre Agar

Bu ortamdan ürease testi için yararlanılır. T. mentagrophytes üreyi çabuk hidrolize ederek koyu kırmızı renk meydana getirir. T. rubrum ise daha yavaş reaksiyon oluşturur. Aşağıdaki tarzda hazırlanır :

Pepton                   1.0 g.

NaCl                     5.0 g.

KH2PO4             2.0 g.

Glukoz                   5.0 g.

Agar                      20.0 g.

Distile su                1000.0 g.

Maddeler distile suda ısıtılarak eritilir, içine 2 ml. fenol red solusyonu (% 50 alkolde % 0.2) katılır ve 115°C'de 15 dakika otoklave edilir, ılıklaştırılır (45 - 50oC) ve içine 100 ml. üre solusyonu (%20 ve filtrasyonla sterilize edilmiş) katılır ve iyice karıştırılır. Tüplere konur ve yatık tarzda katılaştırılır. Sonuçlar bir hafta sonra değerlendirilir. Koyu kırmızı renk pozitiftir.

06.05. Jelatinli Ortam

Bu ortam daha ziyade, N. asteroides ile N. brasiliensis 'i birbirinden ayırmada kullanılır. N. asteroidesjelatinli ortamda üremez. Buna karşın N. brasiliensis iyi gelişir. Aşağıdaki tarzda hazırlanır.

Jelatin                4.0 g.

Distile su      1000.0 ml.

Otoklavda sterilize (110°C'de 15 dakika) edildikten tüplere taksim edilir.

Jelatin erime testi yapmak için bir litre buyyona 120 gram jelatin koymak ve eritmek gereklidir. Test aynen bakterilerde olduğu gibi değerlendirilir. Ayrıca aşağıdaki besi yerinden de aynı test için yararlanılır.

Jelatin                                            100.0 g.

Kalp infusyon buyyon                     25.0 g.

Casitone                                        4.0 g.

Glukoz                                           5.0 g.

Maya ekstraktı                               5.0 g.

Distile su                                        1000.0 ml.

pH                                                 7.0

Maddeler distile suda eritilir ve tüplere taksim edilir. Otoklavda sterilize edilir.

06.06. Tiamin, İnositol, Nikotinik Asit ve Histidine Gereksinim Testi

Mantarların adı geçen maddelere olan ihtiyaçları değişiktir. Bu amaç için vitaminsiz kazein hidrolizat besi yeri kullanılır. Aşağıdaki tarzda hazırlanırlar :

A- Esas ortam kazeinli agar.

B- Tiamin solusyonu

Tiamin HCI         1.0 mg.

Distile su         100.0 ml.

C- İnositol solusyonu

İ-İnositol             250 .0 mg.

Distile su            100.0 ml.

D- Histidin solusyonu

L- Histidin           150.0 mg.

Distile su             100.0 ml.

E- Nikotinik asit

Nikotinik asit           10.0 mg.

Distile su                100.0 ml

Bu vitamin solüsyonları otoklavda 120°C'de 10 dakika sterilize edilir ve buzdolabında (15°C) saklanır. Kullanılacağı zaman kazeinli 100 ml. besi yerine 2 ml. stok vitamin solüsyonundan katılır.

T. equinium, nikotinik asitli ortamda ürer.

T. verrucosum, vitaminsiz ortamda üremez.

İnositol ve tiaminli ortamda ürer.

06.07. Tyrosine Testi

N. asterodies ile N. brasiliensis 'in üreme durumlarını kontrol etmek için tirosinli ortam kullanılır. N. asteroides bu ortamda iyi, N. brasiliensis ise çok zayıf bir üreme gösterir. Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Pepton              5.0  g.

Et ekstraktı        3.0 g.

Agar                 15.0 g.

Tyrosine             5.0 g.

Distile su      1000.0 ml

Ortamın pH'sı 7.0 'ye ayarlanır. Hazırlanan besi yeri petri veya tüplere taksim edilerek kullanılır.

06.08. Kıl İnvazyon (Perforasyon) Testi (Keratinolizis)

Bu test dermatofitlerin kıl üzerinde yaptığı erimeleri ortaya koymak için uygulanır. Mantarların keratinolitik aktivitesini ölçmede çeşitli steril hayvan ve insan kılları kullanılabilir. Kıllar iyice yıkanıp, kurutulduktan sonra 0.5-1 cm. uzunluğunda kesilerek petri kutusuna konur ve otoklavda sterilize edilir. Bir tüp veya petrideki besi yeri (Czapak) üzerinde 8-10 tane kıl konur ve denenmek istenen mantar inokule edilir. On gün sonra kıllardan bazıları çıkarılır, lâm üzerine konur, lakto fenol damlatılır ve lamel kapatılarak mikroskopta incelenir. Kıllarda dıştan içe doğru olan erimeler pozitif olarak değerlendirilir.

Dermatofitler tarafından kılın invazyonu yandaki şekilde gösterilmektedir.

Aşağıdaki çizelgede mantarların, hayvan türlerindeki invazyon testi gösterilmektedir.



06.09. Germ Tüp Testi

Bu testte hücrelerden germ tüpü oluşumu aranır. Aşağıdaki tarzda yapılır:

1- Maya benzeri mikroorganizmalardan 0.5-1.0 ml steril serum ( sığır ve koyun ) içinde hafif bir suspansiyon yapılır.

2-  Süspansiyon 37°C'de 3 saat inkube edilir.

3- Karışımdan bir damla lâma konur ve üzeri lâmelle kapatılır.

4- Mikroskop altında hücrelerden germ tüpünün meydana gelip gelmediği araştırılır.

06.10. Dimorfik Mantarların Maya Formuna Dönüştürülmesi

Miselyal formda üremiş (25°C'de) mantarlar, uygun ortama (BH agar) inokule edildikten sonra 37°C'de üretilirse, maya benzeri forma dönüşür. Ancak bazen birkaç pasaj yapmak gerekir.

07. Solüsyonlar

07.01. Potasyum Hidroksit ( %10 )

Klinik materyalleri direkt muayenede kullanılan bir solüsyondur. KOH'lı lâmın hafifçe ısıtılması materyalin çabuk berraklaşmasını ve dolayısıyla da kolay görülmesini sağlar. Potasyum hidroksit % 20 yoğunlukta, materyali 30-60 dakika berraklaştırır. Bazı mantarlarda (Candida gibi) yalancı formasyonlara neden olması sebebiyle kullanılmamalıdır. Solüsyon taze hazırlanmalıdır.

07.02. Parker Boyası + KOH

Dermatofitleri daha iyi görmede eşit miktarda hidroksit solüsyonuna (% 10), Parker mavisi (%10) katılabilir. Bir ay kadar muhafaza edilebilir.

07.03. Gliserinli Potasyum Hidroksit

Epidermal kazıntı ve kabukları berraklaştırmada kullanılan bir solüsyondur.

Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

KOH                5.0 g.

Gliserin          25.0 g.

Distile su     100.0 ml.

Hazırlandıktan 60 dakika sonra kullanılabilir.

07.04. Lakto fenol Pamuk Mavisi (Aman's Solusyonu)

Klinik materyallerin ve kültürlerin mikroskopik muayenelerinde kullanılan bir solüsyondur. Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Fenol (kristal)                        20.0 g.

Laktik asit                             20.0  g.

Gliserin                                 40.0  g.

Pamuk mavisi (anilin mavisi) 0.05 g.

Distile su                               20.0  ml.

Fenol distile suya katılır ve eritilir. Sonra diğer maddeler ilave edilerek iyice karıştırılır. Uzun süre saklanabilir.

07.05. Polivinil Alkol Solusyonu

Materyalleri ve özellikle, kültürleri muayenede kullanılır. Aşağıdaki tarzda hazırlanır:

Polivinil alkol           10.0 g.

Kloralhidrat              20.0 g.

Laktik asit                35.0 ml.

Karbolik asit (% 15) 25.0 ml.

Gliserin                   10 .0 ml.

Distile su                 50.0 ml.

Yukarıdaki maddeler distile su içinde birbirlerine karıştırılır. Karanlık şişede ve ağzı sıkıca kapalı olarak muhafaza edilir.

08. Boyalar

Dokularda bulunan mantar elementlerini ortaya koymada bir çok yöntemler vardır. Ancak, doku kesitlerinin hazırlanması ve boyanarak muayene edilmeleri genellikle zaman alıcı bir durum gösterir. Buna rağmen, yine de, mikozeslerin kesin teşhisi için boyama yöntemlerinden fazlaca yararlanılır.

Biyopsi ve klinik materyallerinin histopatolojik muayeneleri için alınan örnekler hemen bufferli % 10 formalin solusyonuna (4g. NaH2 PO4 +1000 ml. %10 formalin +%6.5 g. Na2 PO4) veya Zenker + formol solusyonuna konarak fikse edilirler. Fikse edici solüsyonun miktarı, genellikle alınan materyalin 20 katı kadar olmalıdır. Materyal 0.5 cm.den fazla büyüklükte ise, fiksatifin etkimesi için daha küçük parçalara ayrılabilirler. Materyaller fiksatif içinde 24-48 saat bırakıldıktan sonra çıkarılır, çeşme suyunda yıkanır ve tekrar %10'luk formalin solusyonuna konur. Kavanozun ağzı çok iyi kapatıldıktan sonra laboratuara gönderilir. Laboratuarlarda mantarları boyamada en çok kullanılan boyama yöntemleri aşağıdaki gibidir.

08.01. Gram Boyama Yöntemi (Hucker Modifikasyonu)

Klinik materyallerde, kraşede diğer sıvılarda ve dokularda mantar elementlerini ortaya koymada kullanılan bir tekniktir. Ancak bir çok modifikasyonları bulunmaktadır (Hucker, Mac Callum, Brown-Hopps, v.s.). Bunlardan birinin seçimi araştırıcının tercihine ve tecrübesine kalmıştır. Mantar elementleri Gram pozitiftir.

Solüsyonlar

1-Kristal violet sol

A- Kristal violet                        4.0 g. (%85 boya içerikli)

Etil alkol (% 95)                 20.0 ml.

B-Amonyum oksalat      0.8 g.

Distile su                            80.0 ml.

Kristal violet alkolde iyice eritildikten sonra distile su ile 1/10 sulandırılır. Bir kısım kristal violet sol. (1/10) ve 4. kısım sol. B ile (amonyum oksalat sol.) ile karıştırılır.

2- Lugol solusyonu

İyot                        1.0 g.

KI                         2 .0 g.

Distile su    300 .0 ml.

Bir havan içine konan materyaller, azar azar ilave edilen distile su içinde eritilirler. Tam erimesi için bir gece bekletilir.

3-Safranin solusyonu

Safranın(%2.5 sol. %95 alkolde)    10 ml.

Distile su                                                    100 ml.

Boya solusyonu distile suya iyice karıştırılır. Boyama yöntemi

1- Preparat lâm üzerine hazırlanır, kurutulur ve alevde tespit edilir.

2-  Kristal violet ile bir dakika boyanır.

3- Hafif akan su ile yıkanır.

4- Lugol solusyonu ile bir dakika muamele edilir.

5- Hafif akan su ile yıkanır.

6- Alkol ( %95 ) veya alkol + aseton karışımı (eşit miktarda) ile dekolore edilir.

7- Hafif akan su ile yıkanır.

8-  Safranın solusyonu ile 10 saniye boyanır.

9- Hafif akan su ile yıkanır.

10- Kurutulur (havada).

11- Mikroskopla muayene edilir (önce küçük büyütme, sonra immersiyonla).

08.02. Kinyoun’un Boyama Yöntemi

Bu yöntem daha ziyade Nocardiaları ayırmada kullanılır. N. asteroides ve N. brasiliensis hifaları kısmen asido-rezistans özellik gösterirler.

Solüsyonlar

1- Bazik fuksin                         4.0  g.

Fenol                                 8.0  g

Alkol (% 95)                      20.0  ml.

Distile su                            100.0 ml.

2- HCL (konsantre)                  3 g ml.

Etil alkol                         97 ml.

3- Metilen mavisi          2.5 g

Alkol (% 95)                      100.0   ml.

Solüsyonlar ayrı ayrı hazırlanırlar.

Boyama yöntemi

1- Preparat hazırlanır, kurutulur ve alevde tespit edilir.

2- Lâm üzerini kaplayacak tarzda karbol fuksin solusyonu konur ve oda ısısında 3 dakika boyanır.

3- Hafif akan su ile yıkanır.

4-  Asit + alkol içinde 5-10 saniye dekolore edilir.

5- Hafif akan su ile yıkanır.

6- Metilen mavisi ile 30 saniye boyanır.

7- Hafif akan su ile yıkanır.

8- Kurutulur (havada).

9- Mikroskopta muayene (immersiyonla) edilir.