Milliy universiteti biologiya fakulteti

Geterodimerik restriksion endonukleaza R.BbvCIning saytga 
xos DNK-nicking mutantlari 
BbvCI cheklovchi fermenti dupleks DNKni yetti tayanch-juft assimetrik tanib 
olish ketma-ketligida ajratadi,shunday qilib:CCTCAGC/GCTGAGG-->CC--
TCAGC/GC--TGAGG.Biz R.BbvCIning R(1)va R(2)ikki xil subbirlikdan iborat 
ekanligini ko'rsatamiz;har bir bo'linmada DNK zanjiri gidrolizi uchun katalitik joy 
mavjudligi;va bu saytlar mustaqil va o'ziga xos tarzda harakat qiladi. 
O'z navbatida,har bir katalitik joy mutagenez orqali dimerik fermentlarni hosil 
qilish uchun faollashtirildi,ularda faqat bitta joy ishlaydi.O'zgartirilgan fermentlar 

---

10 
DNKni parchalash o'rniga tanib olish ketma-ketligining faqat bitta ipini gidroliz 
qildi.R(1)subbirligidagi katalitik joy funksionalligicha qoladigan fermentlar ketma-
ketlikning 
pastki 
qatoriga 
kirib,CCTCAGC/GC--TGAGG 
hosil 
qiladi,R(2)bo'linmasidagi katalitik joy funktsional bo'lib qolganlar esa CC--
TCAGC/GCTGAGG ni hosil qilib,yuqori ipni egallab oldilar.Ushbu DNK-nicking 
fermentlari 
DNKni 
ta'mirlash,rekombinatsiya 
va 
replikatsiyani 
o'rganish,shuningdek,DNKning parchalanishi,sintezi va kuchaytirilishi kabi 
niklardan boshlanadigan laboratoriya protseduralari uchun foydali bo'lishi mumkin. 
Xulosa 
BbvCI ko'rsatilganidek ,5′-CC↓TCAGC-3'/5'-GC↓TGAGG-3' assimetrik 
DNK ketma -ketligini ajratadi.Ko'pgina II turdagi cheklovchi fermentlar bir xil 
bo'linmalardan iborat bo'lsa-da,BbvCI ikki xil bo'linmaga ega:R 1 ,GC↓TGAGG da 
ta'sir qiladi;va CC↓TCAGC da harakat qiluvchi R 2 .R 1 − R 2 + yoki R 1 + R 2 − 
yoki R 1 − R 2 + yoki R 1 + R 2 − bo‘linmalarida nuqsonlari bo‘lgan BbvCI ning 
ba’zi mutantlari mahalliy bo‘linma tomonidan hujumga uchragan faqat bitta ipni 
ajratib oladi.Proteinning turli konsentrasiyalarida analitik ultratsentrifugalashda 
yovvoyi tipdagi va mutant BbvCI fermentlari ko'p yig'ilgan,ammo R 1 R 2DNKning 
parchalanish reaktsiyalarida ishlatiladigan konsentratsiyalarda geterodimerlar 
Xulosa qilib aytadigan bo'lsak,Nt.BbvCInicking DNK endonukleazasi 
yordamida PCR qo'shimchalari bizning o'zgartirilgan vektorimizga yuqori 
samaradorlik bilan yig'ilishi mumkin.An'anaviy klonlash usullari bilan 
solishtirganda,NiDE usuli bir qator afzalliklarga ega.Birinchidan,NiDE klonlash 
usuli juda samarali.Ikkinchidan,bu vaqtni tejaydi,chunki konstruktsiyalar ~ 2-3 soat 
ichida bajarilishi mumkin.Nihoyat,texnika kamroq mehnat va xarajat talab 
qiladi,chunki hazm qilingan vektor va insertni tozalash endi talab qilinmaydi. 

---

11