Trombin generáció fluorimetriás követésére alkalmas szubsztrátok fejlesztése Kern Anita



Yüklə 24 Kb.
tarix14.01.2017
ölçüsü24 Kb.
Trombin generáció fluorimetriás követésére alkalmas szubsztrátok fejlesztése

Kern Anita, IV. évf. vegyészmérnök

BME Vegyészmérnöki és Biomérnöki Kar



Témavezetők: Dr. Fekete Jenő egyetemi tanár

BME Szervetlen és Analitikai Kémia Tanszék



Dr. Antal József fejlesztőmérnök

Diagon Kft.


A klinikai gyakorlatban a véralvadási folyamatok egyensúlyát alvadási tesztekkel jellemzik (pl. protrombinidő), ezek azonban nem adnak teljes képet a véralvadás kulcs enzime, a trombin aktivitásának változásáról a folyamat egésze során. Erre a célra szolgál a trombin generáció (TG) felvétele, mely a trombin felszabadulását követi az idő függvényében. A trombin generációban eddig használatos kromogén és fluorogén szubsztrátok nem rendelkeznek a trombin specificitását döntően meghatározó C-terminális peptid résszel, így a szelektivitásuk nem kielégítő.

A munka célja, hogy RP-HPLC analitika segítségével olyan teljes hosszúságú peptid szekvenciá(ka)t találjunk, mely(ek) a lehető legszelektívebben reagál(nak) a trombinnal. A kapott peptidgerincre intramolekuláris fluoreszcenciakioltáshoz szükséges csoportokat kapcsolva szelektív és érzékeny szubsztrátot kaphatunk. A munka első lépése két lehetséges peptid szekvencia kiválasztása többszörös szekvenciaillesztés (multiple alignment) alkalmazásával. A csak az N-terminálisukon különböző (valin, illetve triptofán) peptideket megszintetizáltattuk, majd a peptidek trombin specificitását aktivált protrombin komplex koncentrátummal (aPCC) teszteltük. Számottevő preferencia különbséget nem tapasztaltunk. Így távlati céljainknak (intramolekuláris fluoreszcencia kioltás elvén működő szubsztrát) megfelelően a továbbiakban a triptofános változattal dolgoztunk. Fibrinogén mentes, antikoagulánsokat nem tartalmazó enzim rendszer, a PCC aktiválását követve modelleztük a trombin generáció prokoaguláns szakaszát. A modellrendszerrel kapott eredmények szerint a peptid szubsztrát „lassabb” mint a hasonló kromogén szubsztrát, a lassúbb működés a trombin generáció szempontjából kedvező. A munka következő lépése a szubsztrátok tesztelése konkurens enzimekkel (faktor Xa, faktor VIIa), továbbá humán vérplazmán. A specificitási tesztek utolsó lépéseként pedig egészséges és beteg vérmintákban mérjük a trombin generációt.
Yüklə 24 Kb.

Dostları ilə paylaş:




Verilənlər bazası müəlliflik hüququ ilə müdafiə olunur ©www.azkurs.org 2020
rəhbərliyinə müraciət

    Ana səhifə